根こぶ病抵抗性カブ(Brassica rapa L.)培養根へのFura-2の導入と細胞内Ca2+濃度の測定

レコードナンバー

742740

論文タイプ

学術雑誌論文

ALIS書誌ID

ZZ00014669

NACSIS書誌ID

AN00183393

本文言語

ja

著者名

高橋 秀行 ; 石川 寿樹 ; 早川 徹 ; 伊藤 紀美子 ; 三ツ井 敏明 ; 堀 秀隆

誌名

新潟大学農学部研究報告 = Bulletin of the Faculty of Agriculture, Niigata University

発行元

新潟大学農学部

巻号ページ

60巻・1号,p.61-66(2007-08)

ISSN

03858634

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抄録

我々は以前の研究において、カブ（Brassica rapa L.）幼根から誘導した培養根を用い、根こぶ病菌Plasmodiophora brassicaeに対する初期抵抗反応の誘導にCa2＋が必要であることを示した（akahashi e al.、2006）。本研究では、根こぶ病抵抗反応におけるカブ培養根の細胞内Ca2＋濃度（［Ca2＋］cy）の変動を調査するため、Ca2＋の蛍光指示薬Fura-2のアセトキシメチルエステル（Fura-2／AM）をカブ培養根に導入し、蛍光顕微鏡により［Ca2＋］cyを定量的に解析することを試みた。蛍光顕微鏡下で細胞質内にFura-2が導入されたことが確認できたカブ培養根に、カルシウムイオノフォアA23187とCa2＋を同時に処理すると、直ちに［Ca2＋］cyの相対値を示すFura-2蛍光比が上昇したことから、Fura-2／AMを用いた本手法は、培養根における［Ca2＋］cyの変化を観察するのに適していることが示された。さらに［Ca2＋］cyを増加させることが知られている外的刺激として、マンニトール及びNaClの高濃度処理を行ったところ、同様なFura-2蛍光比の急激な増加が観察され、本手法の汎用性が示された。次に、我々は本来の目的である根こぶ病抵抗反応における［Ca2＋］cyの解析に本手法を応用した。Fura-2／AMを導入した根こぶ病抵抗性カブ培養根にP.brassicaeの休眠胞子を処理しても、500秒の測定時間内に［Ca2＋］cyが変化することは無かった。しかし休眠胞子を発芽促進液（GES：germinaion enhancing suspension）で前処理し、同様の実験を行ったところ、非常にわずかであったものの、再現性ある［Ca2＋］cyの上昇が観察された。根こぶ病に対する初期抵抗反応におけるCa2＋の重要性を立証するためには、今後さらなる解析が必要であるが、その過程において本手法は大きく貢献するものと期待される。

引用文献数

22

登録日

2011年1月19日

収録データベース

JASI ; AGROLib