| 摘要 | Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ． ＫＯ−８９４０株は澱粉よりマルトペンタオースを生成する特異なα―アミラーゼを生産する。蛋白質工学的手法により本酵素の反応機構と反応特異性の優れた酵素の作出を目的とする。本酵素の一次構造を明らかにするために遺伝子をクローン化し、Ｓａｎｇｅｒ法により塩基配列を決定した。本酵素の構造遺伝子は、１，８４２塩基対からなりＮ末端側にシグナル配列を含む６１４アミノ酸残基からなるポリペプチドをコードしていた。多くのα―アミラーゼにおいて認められるサブサイトを構成する４つの保存領域が本酵素においても存在することおよびＣ末端側１０５アミノ酸残基の領域が澱粉結合活性を有することが明らかとなった。発現ベクターｐＫＫ２３３−３のｔａｃプロモーター・ＳＤ配列の下流に構造遺伝子を連結したｐＯＳ３４１０を作製した。ｐＯＳ３４１０を保有する大腸菌ＪＭ１０９をＩＰＴＧ処理することにより４５ＩＵ／ｍｌの酵素が誘導された。大腸菌で発現した酵素の主生成物はＰ． ｓｐ ＫＯ−８９４０のそれと同じＧ５であった。また、７０％の酵素活性がペリプラズムに存在していることから、大腸菌においても本酵素のシグナル配列が内膜通過のシグナルとして機能すると考えられる。 |
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