巨大ＤＮＡ整列ライブラリーを利用した物理地図作製手法の開発（１５０）
| 課題番号 | 1994000456 |
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| 研究機関名 | 農業生物資源研究所（生物研） |
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| 研究期間 | 継Ｈ０３〜Ｈ０９ |
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| 年度 | 1994 |
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| 研究問題 | 遺伝子・細胞操作等による新農業生物資源作出技術の開発 |
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| 大課題 | 新育種素材作出のための組換えＤＮＡ技術の開発 |
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| 中課題 | 植物の染色体地図の作製及びその周辺技術の開発 |
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| 小課題 | 巨大ＤＮＡ整列ライブラリーを利用した物理地図作製手法の開発（１５０） |
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| 摘要 | 物理地図作製のために作製したＹＡＣ及びコスミドライブラリーに関して、それぞれ９６穴マイクロタイタープレートに保存した。これらをもとにＢｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ１０００を用いて高密度（ＨＤＲ）フィルターを作製した。１枚のＨＤＲフィルター上には１６枚のマイクロタイタープレートから移した１５３６クローンがそれぞれ独立にドットされている。これらのフィルターを用いて、コロニーハイブリダイゼーション法によって、ＲＦＬＰ連鎖地図上に座乗する各種マーカーのスクリーニングを行なった。方法としては、ナイロンメンブランを使用し、Ｂｉｏｍｅｋ１０００で直接クローンを接種したフィルターをマスターフィルターとして、レプリカを取ることによって多くのフィルターを均一な条件で作製した。このレプリカフィルターを用いることにより、ＥＣＬシステムで良好な結果が再現性良く得られることが確認された。現在、第６染色体上に座乗するマーカーでスクリーニングを進め、ＹＡＣコンティグを作製中である。 |
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| 研究分担 | 企画調整・ゲノム研 |
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| パーマリンク | https://agriknowledge.affrc.go.jp/RN/3030040103 |
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| 収録データベース | 研究課題データベース |
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